土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书

更新时间：2025-03-12

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土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在 585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备仪器和用品：

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿，甲苯、蒸馏水。

新鲜土样风干，过 30-50 目筛。

			对照管		测定管
	土样（g）		0.2		0.2
	甲苯（μl）		30		30
	混匀，25℃静置 15min
	蒸馏水（μl）		200
	试剂一（μl）				200
	混匀，37℃培养 24h
蒸馏水（μl）		400		400
4000rpm，4℃，离心 10min，取上清 300μl 于新的EP 管中
试剂二（μl）		30		30
混匀，沸水浴 5min
试剂三（μl）		900		900
混匀，37℃显色 20min，取 1ml 于 1ml 玻璃比色皿中，蒸馏水调零，测定 585nm 处吸光值，记为A 对照管和A 测定管，ΔA=A 测定管-A 对照管。

计算公式：

标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R²=0.9989；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为吸光值ΔA。

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000= 598×（ΔA +0.0007） V 反总：反应体系总体积，0.63ml；W：样本质量，0.2g；T：反应时间，1d；1000：1mg/ml=1000μg/ml

试剂一充分混匀后再使用。